Estudos de localização e interações proteína-proteína de uma putativa proteína quinase, NtCDKG;2, de Nicotiana tabacum (2013)
- Authors:
- USP affiliated author: FERREIRA, PEDRO BOSCARIOL - FFCLRP
- School: FFCLRP
- Subjects: ANGIOSPERMAS; EXPRESSÃO GÊNICA; PROTEÍNAS QUINASES; PROTEÍNAS RECOMBINANTES; REPRODUÇÃO VEGETAL
- Keywords: 2; CDKG; CTD da RNA polimerase II; Desenvolvimento do pistilo; Interações proteína-proteína; Localização subcelular; Quinases dependentes de ciclinas
- Language: Português
- Abstract: As flores são as estruturas reprodutivas que permitiram o grupo das Angiospermas atingir a diversidade que possuem hoje. A reprodução desse grupo depende do desenvolvimento correto dos órgãos reprodutivos que compõem as flores - o pistilo e os estames. O pistilo, em particular, é responsável pela produção dos gametófitos femininos e proteção do embrião após a fecundação, que só ocorre após interações compatíveis entre esse órgão e os grãos-de-pólen. Para compreender o desenvolvimento do pistilo, é essencial estudar genes preferencialmente ou exclusivamente expressos em seus tecidos. Utilizando a espécie Nicotiana tabacum como modelo, nosso grupo de pesquisa caracterizou um desses genes, denominado SCI1 (Stigma/style Cell-cycle Inhibitor 1). SCI1 controla a proliferação celular em tecidos do pistilo, regulando a proliferação celular nesse órgão, porém seu mecanismo de ação ainda é desconhecido. Para elucidar esse mecanismo, foram feitos em nosso laboratório experimentos que identificaram prováveis parceiros de interação proteína-proteína de SCI1. Dentre os parceiros confirmados, foi identificada NtCDKG;2, uma quinase dependente de ciclina (CDK), que faz parte de uma família de proteínas conhecidas por controlar o ciclo celular, das quais alguns membros estão envolvidos na regulação da transcrição gênica. Entretanto, pouco se sabe sobre a função de CDKG;2 e sua caracterização é necessária. Assim, a sequência de DNA codificadora dessa proteína em N. tabacum foi clonada em nosso laboratório, e foi dado início a um screening de duplo-híbrido em leveduras para buscar prováveis parceiros de interação da mesma. Esse experimento revelou a interação de NtCDKG;2 com NtCDKF;1, uma CDK que está envolvida tanto na regulação do ciclo celular, através da ativação de outras CDKs, quanto na regulação da transcrição, através de mecanismos desconhecidos queenvolvem a fosforilação do domínio C-terminal da RNA Polimerase II (CTD da RNAPII). O presente trabalho teve como objetivos: confirmar a localização subcelular dessa proteína, através da expressão transiente da proteína recombinante GFP-NtCDKG;2; clonar o CTD da RNAPII para realizar ensaios de interação com NtCDKG;2 por duplo-híbrido; realizar a expressão heteróloga da proteína recombinante GST-RNAPII CTD em E. coli, para uso em experimentos futuros; e dar continuidade ao screening de NtCDKG;2. Os resultados obtidos mostram que, independentemente da fusão N- ou C-terminal de GFP em NtCDKG;2, esta proteína se localiza no núcleo (nucleoplasma) das células. Ensaios de interação por BiFC, entre essa proteína e SCI1, indicam que a interação entre elas ocorre no nucléolo. Esse fato permite especular que SCI1, que tem localização nos nucléolos, aja sequestrando NtCDKG;2 do nucleoplasma, inibindo sua atividade. Os ensaios de interação entre NtCDKG;2 e o CTD da RNAPII apresentaram resultado negativo, sugerindo que não há interação direta entre essas proteínas, ainda sendo possível que elas interajam em um complexo proteico, de forma indireta. A expressão de GST-RNAPII CTD em E. coli foi inconclusiva, tornando necessária a otimização das condições de expressão. Foram analisados 26 clones do screening de duplo-híbrido, dos quais 2 apresentaram funções interessantes e potencial para contribuir nas vias de sinalização e controle do ciclo celular e/ou regulação da transcrição gênica
- Imprenta:
- Place of publication: Ribeirão Preto
- Date published: 2013
-
ABNT
FERREIRA, Pedro Boscariol. Estudos de localização e interações proteína-proteína de uma putativa proteína quinase, NtCDKG;2, de Nicotiana tabacum. 2013. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) – Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. Disponível em: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/7ce974ca-0c09-40a1-b029-4604fde68102/PedroBoscariolFerreira2.pdf. Acesso em: 27 abr. 2024. -
APA
Ferreira, P. B. (2013). Estudos de localização e interações proteína-proteína de uma putativa proteína quinase, NtCDKG;2, de Nicotiana tabacum (Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação). Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/7ce974ca-0c09-40a1-b029-4604fde68102/PedroBoscariolFerreira2.pdf -
NLM
Ferreira PB. Estudos de localização e interações proteína-proteína de uma putativa proteína quinase, NtCDKG;2, de Nicotiana tabacum [Internet]. 2013 ;[citado 2024 abr. 27 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/7ce974ca-0c09-40a1-b029-4604fde68102/PedroBoscariolFerreira2.pdf -
Vancouver
Ferreira PB. Estudos de localização e interações proteína-proteína de uma putativa proteína quinase, NtCDKG;2, de Nicotiana tabacum [Internet]. 2013 ;[citado 2024 abr. 27 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/7ce974ca-0c09-40a1-b029-4604fde68102/PedroBoscariolFerreira2.pdf
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