Produção de L-asparaginase P40S/S206C PEGuilada em resíduo N-terminal, e estudo de sua atividade citotóxica in vitro frente à células leucêmicas (2023)
- Authors:
- USP affiliated author: BENEVIDES, GUILHERME RAMOS - FCF
- School: FCF
- Subject: LEUCEMIA
- Keywords: L-asparaginase P40S/S206C; PEGuilação; biofármaco
- Language: Português
- Abstract: Leucemias representam cerca de um quarto de todos os casos de câncer infantil entre aqueles com ocorrência em menores de 15 anos de idade, com a Leucemia Linfoide Aguda (LLA) representando 80% dos casos de leucemia infantil. A LLA é uma doença maligna que afeta a série linfoide do sistema hematopoiético, com aproximadamente 85% dos casos originados de linfócitos B e 15% derivados de linfócitos T. Seu desenvolvimento está relacionado a fatores genéticos, mais especificamente a anomalias cromossômicas, como aneuploidia e mutações estruturais. Como primeira linha de tratamento, tem-se a aplicação de L asparaginase, um biofármaco enzimático que atua na depleção de asparagina sérica, representando um mecanismo seletivo às células leucêmicas. Apesar da alta eficiência associada ao medicamento, a L-asparaginase possui diversos efeitos adversos, os quais têm sido enfrentados através de processos de PEGuilação, que também apresentam desafios relativos à reprodutibilidade, variabilidade e imunogenicidade. Neste trabalho investigou-se a PEGuilação dirigida ao sítio N terminal de uma L-asparaginase mutante P40S/S206C, que demonstrou possuir resistência às proteases catepsina B e endopeptidase. Esta característica confere à enzima a capacidade de driblar os mecanismos de sensibilização específicos ao biofármaco, através do impedimento da ação proteolítica, o que a torna menos imunogênica e prolonga sua meia vida plasmática. Os resultados indicaram que a reação de monoPEGuilação é favorecida pelas condições: tampão PBS 1OmM pH 7,5, razão PEG:Proteína de 25:1 e tempo de reação de 30 minutos. Apesar de resultar em certo grau de polidispersão, o protocolo escolhido apresentou o melhor rendimento da espécie monoPEGuilada. Houve manutenção da atividade específica da L-asparaginase após a reação de monoPEGuilaçãomantendo valores similares à espécie nativa. Estudos de citotoxicidade foram realizados em células MOLT-4 demonstrando a atividade citotóxica da enzima livre frente a essa linhagem leucêmica. A monoPEGuilação sítio-dirigida apresentou baixa interferências nos valores de inibição, mostrando que a enzima reteve seu poder citotóxico. Considerando o potencial da L-asparaginase P40S/206C monoPEGuilada para o desenvolvimento de um novo biofármaco, sugere-se como perspectiva futura a realização de estudos de estabilidade, resistência a proteases e testes in vitro de imunogenicidade
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ABNT
BENEVIDES, Guilherme Ramos. Produção de L-asparaginase P40S/S206C PEGuilada em resíduo N-terminal, e estudo de sua atividade citotóxica in vitro frente à células leucêmicas. 2023. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação) – Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2023. Disponível em: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/1cf061a0-3701-48ab-925c-46eac9a94770/TCC_GUILHERME%20RAMOS%20BENEVIDES.pdf. Acesso em: 27 abr. 2024. -
APA
Benevides, G. R. (2023). Produção de L-asparaginase P40S/S206C PEGuilada em resíduo N-terminal, e estudo de sua atividade citotóxica in vitro frente à células leucêmicas (Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação). Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/1cf061a0-3701-48ab-925c-46eac9a94770/TCC_GUILHERME%20RAMOS%20BENEVIDES.pdf -
NLM
Benevides GR. Produção de L-asparaginase P40S/S206C PEGuilada em resíduo N-terminal, e estudo de sua atividade citotóxica in vitro frente à células leucêmicas [Internet]. 2023 ;[citado 2024 abr. 27 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/1cf061a0-3701-48ab-925c-46eac9a94770/TCC_GUILHERME%20RAMOS%20BENEVIDES.pdf -
Vancouver
Benevides GR. Produção de L-asparaginase P40S/S206C PEGuilada em resíduo N-terminal, e estudo de sua atividade citotóxica in vitro frente à células leucêmicas [Internet]. 2023 ;[citado 2024 abr. 27 ] Available from: https://bdta.abcd.usp.br/directbitstream/1cf061a0-3701-48ab-925c-46eac9a94770/TCC_GUILHERME%20RAMOS%20BENEVIDES.pdf
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